Kromatografiaa on erilaisia, kuten paperikromatografia, pylväskromatografia, kaasukromatografia, tasomainen kromatografia, affiniteettikromatografia, ohutkerroskromatografia ja nestekromatografia.
Nestekromatografia on tekniikka, jota käytetään laboratorioissa liuenneiden molekyylien tai ionien erottamiseksi nestefaasissa. Prosessi alkoi puolivälissä 19th century, kun sitä käytettiin lähinnä erillisiä klorofylli kasvi pigmenttejä. Siitä lähtien tätä prosessia kehitti venäläinen kasvitieteilijä Mihail Semyonovich Tsvet, joka käytti kalsiumkarbonaattipylväitä 1900-luvun alussa.
Kromatografiaa on erilaisia, kuten paperikromatografia, pylväskromatografia, kaasukromatografia, tasomainen kromatografia, affiniteettikromatografia, ohutkerroskromatografia ja nestekromatografia. Tässä artikkelissa syvennetään yksityiskohtia jälkimmäisestä, jota kutsutaan nykyään korkeapaineiseksi nestekromatografiaksi.
Käänteisfaasinen nestekromatografia
Tässä prosessissa on kaksi alatyyppiä, jotka tunnetaan nimellä normaalivaiheinen nestekromatografia (NPLC), joissa kiinteä vaihe on polaarisempi kuin liikkuva vaihe. Toinen alatyyppi on käänteisfaasinestekromatografia (RPLC), jossa liikkuva vaihe on polaarisempi. Tämä tyyppi on myös nykyään yleisimmin käytetty erotustekniikka.
Nestekromatografiaprosessi ottaa nestemäisen kohteen pakotetuksi kolonniin, joka on pakattu pallomaisella tai epäsäännöllisen muotoisella tai huokoisella monoliittisella kerroksella käyttäen erittäin suurta painetta. Se käyttää monimutkaisia instrumentteja nestenäytteen pumppaamiseen pumpun läpi, jotta saadaan nopeampi analyysiaika ja suurempi resoluutio. Prosessia suoritettaessa on välttämätöntä määrittää, mitä erotustapaa käytetään. Yleensä veteen liukenemattomat tai ei-polaariset näytteet käyttävät normaalia faasia, kun taas liukoiset näytteet ottavat käänteisen faasin. Tyypillisesti laboratorioasiantuntijat ottavat huomioon tiettyjä tekijöitä valitessaan käytettäviä liuottimia. Liuottimen vahvuus perustuu piidioksidin tai alumiinioksidin asteikkoihin ja liuottimen napaisuusindeksiin. Kaikkein yhteinen käänteisfaasi liuottimia ovat metanoli, asetonitriili, tetrahydrofuraani ja vesi. Näillä liuottimilla on alhainen viskositeetti, UV-läpinäkyvyys ja ne sekoittuvat toisiinsa.
Toinen alatyyppi on käänteisfaasinestekromatografia (RPLC), jossa liikkuva vaihe on polaarisempi.
Kun on harkittu käytettävää tyyppiä - normaali kromatografia tai käänteinen - seuraava vaihe on ladata seos pylvään päälle ja sen jälkeen lisää liuotinta. Näyteseoksen eri komponentit kulkevat tämän kolonnin läpi eri nopeuksilla johtuen eroista niiden jakautumiskäyttäytymisissä liikkuvan nestefaasin ja paikallaan olevan faasin välillä.
Lämpötila vaikuttaa nestekromatografiaan
Koska lämpötilan vaihtelut vaikuttavat nestekromatografiaan vähäisessä mittakaavassa toisin kuin muut kromatografiamenetelmät, gradienttieluutioita on käytetty vähentämään analyysiaikaa ja parantamaan seoksen kokonaisresoluutiota. Kaikissa nestekromatografiamenetelmissä ei kuitenkaan voida käyttää gradienttieluutioita, koska neste-neste-erotuksella on yleensä epävakaat tulokset, kun taas koon poissulkemisilla ei ole lainkaan hyviä tuloksia. Ioninvaihtomenetelmissä sekä adsorptio- ja sidosfaasimenetelmissä käytetään gradienttieluutioita hyvin.
Nestekromatografiaa käytetään yleisimmin laboratorion valmistelutyössä joidenkin seoksen komponenttien puhdistamiseksi ja eristämiseksi. Silloin kun on olemassa pieniä kertakäyttöisiä pylväitä, nestekromatografiaa käytetään myös sellaisissa erittäin pienissä erotuksissa.
Nykyään nestekromatografiaa käytetään yleisimmin tapana testata vesinäytteitä haitallisten epäpuhtauksien ja vesien pilaantumisen varalta. Tutkijat etsivät edelleen keinoja tämän alan parantamiseksi, vaikka ihmisten nykyinen ymmärrys tästä tekniikasta on todettu olevan riittävä osallistumaan tosielämän sovelluksiin.
